體外哺乳動物細胞基因突變試驗儀實驗目的：

本試驗用于檢測受試物對體外培養(yǎng)的哺乳動物細胞的基因突變作用,包括堿基對突變、移碼突變和缺失等,從而評價受試物引起突變的可能性。

體外哺乳動物細胞基因突變試驗儀實驗概述：

本試驗屬正向突變試驗,可檢出堿基置換型致突變物和移碼型致突變物。在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下,使細胞暴露于受試物一定時間,然后將細胞傳代培養(yǎng)。胸苷激酶水平正常的細胞對三氟胸苷trifluorothymidine,TFT等敏感,因而在培養(yǎng)液中不能生長分裂,突變細胞則不敏感,在含有三氟胸苷的選擇性培養(yǎng)液中能繼續(xù)分裂并形成集落。相似的,次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基酶(HPRT)正常的細胞對 6-硫代鳥嘌呤6-thioguanine,6-TG敏感,突變的細胞則不敏感,在含有 6-硫代鳥嘌呤的選擇性培養(yǎng)液中可生長形成集落。基于突變集落數(shù),計算突變頻率以評價受試物的致突變性。

體外哺乳動物細胞基因突變試驗儀應用范圍

應用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領域。

符合標準：

GB/T 15670.20-2017《農(nóng)藥登記毒理學試驗方法第20部分:體外哺乳動物細胞基因突變試驗》

試驗流程

1細胞培養(yǎng):

選擇合適細胞系如L5178Y、CHO，常規(guī)傳代培養(yǎng)

2受試物處理:

暴露于不同濃度受試物需設陰性/陽性對照

3表達期:

預留足夠時間通常7-10天使突變表型顯現(xiàn)。

4.突變體篩選:

TK試驗:使用三氟胸苷TFT篩選TK突變體。

HPRT試驗:使用6-硫代鳥嘌呤6-TG選HPRT突變體。

5克隆形成分析:

計數(shù)突變集落，計算突變頻率突變集落數(shù)/存活細胞數(shù)

6數(shù)據(jù)統(tǒng)計:

與對照組比較，判斷突變率是否顯著增加。

注意事項

1細胞活力控制:受試物濃度需保證細胞存活率通常>50%

2代謝活化系統(tǒng):需加入S9混合物(模擬體內代謝，如Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9。

3假陽性/陰性:避免pH、滲透壓等非特異性因素干擾。

4合規(guī)性:   遵循國際指南如OECD 490、ICH S2R1。

計算：